重庆大学附属肿瘤医院病理科：什么是流式细胞术
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1、什么是流式细胞术？
流式细胞术（Flow CytoMetry，FCM）是以流式细胞仪为主要分析设备，对悬浮在液体环境中的单个活细胞进行分析测量的一种高难度检测技术，常简称为流式（flow）。自20世纪70年代以来，基于荧光的流式细胞技术到现在已经发展了50多年，是非常成熟的细胞检测技术，在生物医学领域得到了广泛应用。
在病理诊断中，它已经成为基因诊断技术后的又一个高科技，并且在肿瘤病理学研究中发挥着越来越重要作用。
http://mmbyh.com/data/attachment/forum/202303/29/163022j44o6ci6q2hoq292.jpgBD FACSCanto II流式细胞仪
2、流式细胞术的原理是什么？
流式细胞仪由分析系统、电子系统、光学系统、液流系统四个部分组成。它只可以对悬浮的微粒或单细胞的信号进行检测。
流式细胞术工作原理是：首先通过激光测量鞘液中的染色细胞标志物，然后记录荧光强度、荧光宽度及散射光强度等参数。此外，根据荧光标记的被检测物质的单克隆抗体的类型不同，对细胞成分进行分析。
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流式细胞术原理图
流式细胞仪对散射光和荧光信号进行采集和分析。其中的荧光信号，可以是细胞或颗粒在激发光照射下产生的某种类型的自身荧光；也可以是标本处理过程中，某种特定物质标记的荧光物质所发出的特异的荧光信号。
使标本中的细胞或颗粒性物质带上某种荧光物质而具有遭受激光照射能够发出相应特异性荧光，这就是“荧光染色技术”。所使用的荧光物质也称荧光染料、荧光色素或荧光素。
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流式细胞术原理图
3、流式细胞术的作用
（1）流式细胞术与DNA 倍体分析
DNA非整倍体的出现可能是癌前病变发生早期癌变的一个重要指标。
细胞DNA含量及倍体的定量分析可以对诊断恶性肿瘤提供帮助。近年来，临床中逐渐开始采用流式细胞术对脱落细胞进行DNA定量检测。尤其是对食管、 胃、 宫颈、 结肠、 鼻咽、口腔粘膜、宫内膜等处的癌前病变的研究结果表明：DNA指数和非整倍体出现的概率随着上皮增生程度增高而增高，非整倍体的细胞，经随访发现近半数发生癌变。
这就意味着DNA非整倍体的出现率与癌变率及不典型增生的程度密切相关。
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图a：PI标记法检测细胞周期流式图图b: 肿瘤组织细胞DNA直方图
DNA倍体分析的相关临床应用如下：
①用于肿瘤早期诊断与鉴别；
②用于可疑癌的诊断；③用于良恶性胸腔积液、腹水的鉴别诊断；④用于临床肿瘤治疗效果监测；⑤用于临床抗肿瘤治疗时的药物选择；⑥用于早期淋巴瘤的诊断；⑦用于良性肿瘤与中低度恶性肿瘤的鉴别；⑧用于肿瘤患者的预后判断。
（2）流式细胞术与白血病免疫分型诊断
使用荧光素标记的单克隆抗体作为分子探针，通过流式细胞仪检测细胞上的特异性抗原分子，从而对细胞群进行分类鉴别，称为流式细胞免疫分型（flow cytometric analysis ofimmunophenotyping）。
流式细胞仪可同时鉴别单个细胞上的多种抗原，而且在极短时间内能分析大量细胞，对疾病尤其白血病的诊断、治疗及发病机制研究都有重要的意义。
流式细胞免疫分型可提高恶性血液病诊断与分型的准确性，检测微小残留病并判断预后。
其主要优点表现如下：
①区分淋巴细胞与髓系细胞，区分T淋巴细胞与B淋巴细胞。②确定白血病细胞群和白血病细胞所处的阶段。③敏感性高于基因和染色体，比染色体和基因分析快捷。
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血液病患者的整个病程中需要多次进行流式检测。
初诊时需要流式帮助确诊和分型；病程中需要流式监测治疗效果；骨髓移植时需要流式对供者CD34阳性细胞进行准确计数；化疗或者骨髓移植完全缓解后需要流式进行微小残留病变（MRD）的检测。
（3）流式细胞术与淋巴瘤免疫分型诊断
淋巴瘤是临床上诊断难度较大的一类疾病，需要综合形态学、免疫表型、遗传学以及临床表现，但任何单一方面的信息均不是诊断的金标准。流式在淋巴瘤诊断、分型、分期及残留病灶的监测中具有独立的重要作用。
流式细胞术对于淋巴瘤的早期诊断具有比形态学更为敏感、准确的优点，它可以测得正常细胞和异常细胞DNA含量间的微小差别，在形态学还不能作出诊断之前，就可提供确切的诊断信息。
淋巴瘤免疫分型诊断作为与免疫组织化学相补的诊断方法，以其快速、客观、定量及多参数分析等独特优势，在淋巴瘤诊断方面发挥着不可替代的作用。
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弥漫大B细胞淋巴瘤患者流式免疫分型结果
总之，随着流式细胞术的发展，多色流式、抗体技术等应用，其在肿瘤病理学诊断中起到了越来越重要的作用，已经成为了病理诊断的重要工具。
此外，流式免疫荧光染色技术作为与免疫组织化学相补的诊断方法，因其快速、客观、定量及多参数分析等独特优势，目前已成为了病理科不可或缺的诊断方式之一。这将在未来对患者疾病的诊断做出越来越大的贡献。
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