一疗结束？该怎么办？

白战士守护者 发表于 2024-06-10 23:09
为什么维奈去甲基就算了？

走化疗用作cebpa bzip巩固的所有数据都不如阿糖联合啊，很简单的道理。

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icdesigner 发表于 2024-06-10 14:27
可能是院内做的检查查不了定量？或者医生习惯

点突变怎么定量？融合突变可以定量，原理是引物一和片段a结合，引物二和片段b结合。开始走，然后倍增。加上荧光信号，就可以定量。如果没有融合，片段ab距离非常长，pcr走不了那么远。如果你是点突变，引物一，引物二结合的片段加位置都一毛一样，中间有个核苷酸不同，通过测序可以定性。

Wset 发表于 2024-06-11 13:22
点突变怎么定量？融合突变可以定量，原理是引物一和片段a结合，引物二和片段b结合。开始走，然后倍增。加上荧光信号，就可以定量。如果没有融合，片段ab距离非常长，pcr走不了那么远。如果你是点突变，引物一，引物二结合的片段加位置都一毛一样，中间有个核苷酸不同，通过测序可以定性。

具体怎么操作的我不懂，不过我见过用ddPCR测点突变定量的报告，用NGS应该也可以就是贵。

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我查不到。从原理来讲非常可疑。没突变的，和突变的产物，就是一毛一样的分辨不了。当年新冠测点突变。就是只能测序。有人设计了特殊引物，就包括突变点，部分三级结构影响了引物结合能力，出来的pcr如果循环次数够低，才能看出凝胶图上的差别。根本不能大规模用，还是老实原始测序

Wset 发表于 2024-06-11 14:29
我查不到。从原理来讲非常可疑。没突变的，和突变的产物，就是一毛一样的分辨不了。当年新冠测点突变。就是只能测序。有人设计了特殊引物，就包括突变点，部分三级结构影响了引物结合能力，出来的pcr如果循环次数够低，才能看出凝胶图上的差别。根本不能大规模用，还是老实原始测序

在微信里搜索ddpcr会出来很多介绍文章。

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我查了pubmed，ddPCR是高级荧光PCR就两条引物不能看突变。你发的文献起作用的事一个叫drop off pcr 的技术。多了两个荧光探针。类似我上面说的新冠变种检测，利用点突变的三级结构改变影响探针结合。有些文献讨论特定基因退火温度，普遍商业化还早。我猜医生开不出来

Wset 发表于 2024-06-11 17:26
我查了pubmed，ddPCR是高级荧光PCR就两条引物不能看突变。你发的文献起作用的事一个叫drop off pcr 的技术。多了两个荧光探针。类似我上面说的新冠变种检测，利用点突变的三级结构改变影响探针结合。有些文献讨论特定基因退火温度，普遍商业化还早。我猜医生开不出来

上面不是说了嘛，目前只有特定机构能做，要外送。有些医院在用了，有些医院还没有。

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Wset 发表于 2024-06-11 13:22
点突变怎么定量？融合突变可以定量，原理是引物一和片段a结合，引物二和片段b结合。开始走，然后倍增。加上荧光信号，就可以定量。如果没有融合，片段ab距离非常长，pcr走不了那么远。如果你是点突变，引物一，引物二结合的片段加位置都一毛一样，中间有个核苷酸不同，通过测序可以定性。

不需要谈到绝对定量的dpcr，先说qpcr吧，你确定基因突变野生型和突变型相同引物扩增出的产物片段大小一致吗

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第一次贵因为他用了几十上百对引物一起跑啊。他不知道哪个引物能跑出来。后面800就用一对了特异引物呗。就是新冠测核酸那种原理。800都含泪赚死。

不加两个特异性探针只有一对引物和一个显色信号各种pcr都分辨不出来。。上面那个报告不是点突变吗。。难道我眼花又理解错了。缺失突变你少三个碱基你打算怎么分辨。融合突变我上面说了不融合就跑不出来两个引物隔太远啊。两个探针要过程中drop off 掉一个，敲掉一半的信号。